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临床检验技师《临床免疫学》2017年知识梳理
1.免疫组织化学技术：又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。
种类：荧光免疫组织化学技术、酶免疫组织化学技术、免疫金(银)组织化学技术、亲和组织化学技术、免疫电竞组织化学技术等
基本过程：1.抗原的提取和纯化2.免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化3.将标记物与抗体结合形成标记抗体4.标本的处理与制备5.抗原抗体免疫学反应以及标记物呈色反应6.观察结果
2.非标记抗体酶免疫组织化学染色
【技术类型】
(一)酶桥法
抗酶抗体作为第三抗体，通过桥抗体(第二抗体)将特异性识别组织抗原的第一抗体连接，形成酶联的 抗原-抗体 复合物，加底物显色。
本法较酶标法的敏感性有所提高，但操作分四步较为复杂。
(二)过氧化物酶抗过氧化物酶酶(PAP)法
是在酶桥法的基础上加以改良。本法首先将酶桥法的第三抗体(抗酶抗体)与酶组成可溶性复合物(PAP复合物)。该复合物由两个抗酶抗体和三个过氧化物酶分子组成，呈五角形结构，非常稳定。
通过桥抗体(第二抗体)，将特异性识别组织抗原的第一抗体与PAP复合物的抗酶抗体连接起来，此时要求特异性第一抗体与第三抗体的动物种属相同
(三)双桥PAP法
该法建立在PAP法的基础上。其基本原理是在PAP法中通过两次连接桥抗体和PAP复合物而建立起来的，通过双桥可结合更多的PAP复合物于抗原分子上，以增强敏感性。这种放大方式重复使用桥抗体，使桥抗体与PAP复合物中抗酶抗体的未饱和Fc段结合，或桥抗体与特异性第一抗体未饱和的Fc段结合。如此对抗原有明显放大作用，对于组织细胞微量抗原的检测又实用价值。
(四)碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法(APAAP)法
因部分组织细胞内含内源性过氧化物酶，限制了HRP的广泛应用，需选用其他酶免疫组织化学反应。本法是用碱性磷酸酶(ALP)代替HRP建立的碱性磷酸酶(ALP)-抗碱性磷酸酶(AAP)法，简称APAAP。其技术要点与PAP法相似。
【常用酶及显色底物】
最常用的是辣根过氧化物酶(HRP)，常用的供氢体有二氨基联苯胺(DAB)，反应产物呈棕色。其他有：氨基乙基卡巴唑(AEC)，反应产物为橘红色;4-氯-1-萘酚，反应产物为灰蓝色。
碱性磷酸酶为磷酸酯的水解酶，可通过两种反应显色：①偶氮偶联反应，最终与重氮化合物作用生成不溶沉淀，如快蓝为深蓝色，快红为红色。②靛蓝四唑反应，最终形成紫蓝色不溶沉淀。
3.亲和组织化学类型：生物素-亲和素法(亲和素-生物素-过氧化酶复合物技术ABC、桥联亲和素-生物素技术BRAB、标记亲和素-生物素技术LAB)、葡萄球菌蛋白A法、凝集素法、链霉亲和素-生物素法。
